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P19 小鼠畸胎瘤細胞傳代/復蘇技巧
更新時(shí)間:2024-07-09 點(diǎn)擊量:81

P19 小鼠畸胎瘤細胞

Mouse Teratoma Cells ,P19

貨號:YJ-m043(種屬鑒定)

價(jià)格: 1500.0

規格: 1*106

細胞介紹

加拿大渥太華大學(xué)的Mc Burney 等在1982 年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體外培養的多能干細胞, P19 細胞團經(jīng)RA 誘導可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞和纖維母細胞; 而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO ) 誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;P19細胞向神經(jīng)元分化的過(guò)程中,神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達模式基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過(guò)程, 因此, P19 目前被用作一個(gè)研究神經(jīng)發(fā)育的體外模型。

P19 細胞作為研究神經(jīng)分化機制的模型, 顯著(zhù)區別于其他細胞系的四大特點(diǎn)是:

它具有正常小鼠的二倍體核型, 細胞分裂快, 可在體外迅速大量擴增, 多次傳代也不喪失其分化能力。

②P19 細胞具有多種分化潛力, 不同誘導條件下可定向分化成不同類(lèi)型的細胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類(lèi)型細胞。

根據P19 細胞誘導分化分階段進(jìn)行的特點(diǎn), 能將神經(jīng)分化的早期機制與參與突起延伸的機制分開(kāi)研究。

該細胞易于轉染, 且轉染后仍能正常分化, 適于進(jìn)行細胞基因研究。通過(guò)轉染正?;蛲蛔兊哪康幕?/span>, 增強或抑制它們的表達水平可用于研究這些基因在神經(jīng)分化中的作用。另外, 利用反義RNA 阻斷內源蛋白的表達, 可用來(lái)觀(guān)察這些蛋白在神經(jīng)分化中的作用。

細胞特性

1 來(lái)源:胚胎;畸胎癌

2 形態(tài):上皮細胞樣 貼壁生長(cháng)

3 含量:>1x10^6  細胞數

4 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

4備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶12傳代 。

一.培養基及培養凍存條件準備:

1)準備MEMα基礎培養基 (推薦:YJ-0003),小牛血清 7.5 % ,優(yōu)質(zhì)胎牛血清2.5 %,P/S 1 %

2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

二.細胞處理:

1 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

P19 小鼠畸胎瘤細胞傳代/復蘇技巧


下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

References:

1.張金平等. 全反式維甲酸體外誘導P19細胞向心肌方向分化.[J]中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志.2012.1,

2.梅宇欽等. 建立經(jīng)優(yōu)化的促P19鼠胚胎癌細胞神經(jīng)分化模型.浙江大學(xué)學(xué)報(醫學(xué)版)2012.04)

注意事項

1.收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)(視細胞密度而定)穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片,觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài),故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫學(xué)實(shí)驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗技術(shù)服務(wù):



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